Flash反相纯化中，如何高效的蒸发水相溶剂

biotagebiotage flash26-06-24 11:09:34

反相色谱法是液相色谱中广泛应用的一种分析和纯化各类样品的有效的基础常规方法。然而，即使应用广泛，其也存在着诸多挑战，其中之一就是馏分沸点较高，旋转蒸发时需要消耗大量的时间成本，并且随着纯化规模的增加，此问题会变得更加突出。因此在反相Flash纯化之后的馏分处理的过程当中，数小时的旋转蒸发后处理变得司空见惯，因为我们需要将纯化后的馏分浓缩至一定程度后，再进行冻干，最终才能得到干燥的目标产物；整个流程非常漫长。

然而在这一样品浓缩的过程当中，我们其实可以另辟蹊径，提供一个全新的蒸发浓缩思路，即将纯化后的单一馏分通过Biotage的Flash和外置泵重新注射进Sfär C18 反相色谱柱中，随后用纯甲醇或者乙腈进行冲洗，从而得到高度浓缩，同时含水量很少的单一溶剂样品，随后快速旋干即可。从实际的应用结果可以发现，处理之后，所需要的浓缩时间只需要传统方法的1/10，很有实际应用价值。

下面我们为大家介绍此方法的具体实施过程：

所需设备：Selekt 快速纯化系统 + 外置泵(100mL/mL)

◆Selekt 快速纯化系统

样品：2mg黄色样品，溶于300m去离子水中

反相色谱柱：Biotage® Sfär C18 D 12 g [货号：FSUD-0401-0012]

流速: 12 mL/min.

溶剂: A) H2O B) MeOH

预冲洗 & 平衡: MeOH 2CV→H2O 3CV

冲洗方法: 100% B (3CV)

◆外置泵(100mL/mL)

SIMDOS 10 (byKNF)

◆方法：

1. 使用平衡后的C18色谱柱（H2O 3CV），通过外置泵将稀释后的样品注射进色谱柱当中，流速设置为50 ml/min

2. 100% 甲醇MeOH冲洗色谱柱，将样品冲洗出来

3. Flash会自动收集有紫外信号的馏分，即浓缩后的馏分

4. 最终得到的甲醇冲洗下来馏分浓缩即可

结果

可以发现通过以上方法，可以很容易的将300ml样品浓缩到2ml甲醇溶剂当中，方便了后期的馏份处理。常规传统方法需要150分钟以上的时间，而此方法只需要大约15分钟(1/10)，同时不会有样品损失的风险。

扩展讨论：

通过使用Selekt 以及Sfär色谱柱和外置泵的联用，我们实现了水溶液的高效浓缩。即使将水溶液用量增加到1.3L，总操作时间也仅为35min。其中，由于增加了1L体积，其上样时间增加了20分钟，但洗脱时间并不受影响。

通过时间证明，此方法切实可行，同时具有非常多的优点，值得大力推广。

具体优点归纳如下:

· 显著缩短浓缩时间(馏分体积越大，节省时间越多)

· 不会有旋转蒸发时的暴沸风险

· 可直接在室温下浓缩(对不稳定物质特别有效)

除了处理多水馏分的体系，此方法还可以进一步衍生，应用于更多的场景：

· 脱盐

· 反相水溶性样品的预处理

· 缓冲液更换，等等

下图是实际的脱盐流程。

由于C18优秀的性能和应用广度，可以有非常多的扩展应用，在拥有了此应用方法之后，C18的使用效率可以进一步得到提升。

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标签：C18色谱柱 Flash反相纯化色谱柱

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